Esai ABTS
Ini adalah metode analitik yang menggunakan pengukuran spektrofotometri untuk menentukan kapasitas antioksidan sampel. Menggunakan spektrofotometer UV-Vis, absorbansi larutan yang mengandung ABTS radikal • + diukur, dihasilkan oleh oksidasi ABST (2, 2'-azinobis (3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonate), suatu zat tak berwarna dalam bentuk Radikal diwarnai dengan menyerap karakteristik panjang gelombang dalam kisaran yang terlihat. Penambahan solusi ABTS • + molekul antioksidan, yang dapat bertindak dengan mentransfer hidrogen dan elektron, menentukan reduksi radikal ke bentuk tidak berwarna, dengan perubahan warna akibat reaksi campuran. Pemutihan ini, sebanding dengan jumlah antioksidan yang ada, dapat diukur sebagai penurunan absorbansi selama waktu tertentu pada panjang gelombang tertentu (734 nm). Kekuatan antioksidan dinyatakan dengan perbandingan dengan nilai absorbansi diukur untuk jumlah molekul antioksidan yang diketahui dipilih sebagai standar acuan, yang biasanya asam askorbat atau Trolox (dalam hal ini kita berbicara tentang TEAC Trolox Equivalent Antioksidan Kapasitas aktivitas antioksidan.
Pengukuran daya antioksidan berdasarkan penggunaan ABTS memiliki keuntungan karena sederhana dan cepat. Selain itu, memungkinkan pengukuran zat antioksidan baik hidrofilik dan lipofilik dalam kisaran pH yang luas. Namun, harus diingat bahwa radikal yang digunakan (ABTS • +) tidak fisiologis dan tidak ada dalam sistem biologis dan bahwa masalah pengulangan pengukuran karena reaksi kinetika berbagai antioksidan yang terlibat sering disorot.
FRAP (Daya Antioksidan Pengurangan Ferris)
Tes FRAP mengukur pengurangan kemampuan antioksidan terhadap ion besi. Ini adalah metode berdasarkan transfer elektron, di mana ion besi berpindah dari Fe3 + ke Fe2 +. Di bawah kondisi pH tertentu (3, 6) dan di hadapan TPTZ (2, 4, 6-tris (2-piridil) -s-triazin), ion-ion ini membentuk kompleks dengan karakteristik yang berbeda, khususnya turunan tereduksi (Fe2 + -TPTZ) mengasumsikan warna biru yang memiliki penyerapan maksimum pada 593 nm yang dapat diukur secara spektrofotometri. Pengurangan kapasitas zat antioksidan karena itu dapat diukur sebagai perubahan dalam absorbansi larutan yang mengandung oksidan pada panjang gelombang yang dibuat dengan perbandingan dengan variasi relatif terhadap standar (misalnya asam askorbat).
Tes FRAP dirancang untuk mengukur kekuatan reduksi plasma, tetapi kemudian diadaptasi untuk menguji kapasitas antioksidan senyawa murni dan matriks kompleks. Faktanya, karena metode ini hanya memungkinkan untuk mengevaluasi kapasitas pengurangan dengan transfer elektron, sepenuhnya mengabaikan aksi antioksidan yang bertindak melalui transfer hidrogen, metode ini tidak memungkinkan untuk mengukur kontribusi molekul, seperti tiol dan protein, yang memainkan peran antioksidan. mendasar dalam cairan biologis (misalnya darah). Keuntungan menggunakan metode ini adalah metode ini merupakan metode yang paling sederhana, tercepat, dan paling murah untuk menentukan kapasitas antioksidan secara in vitro.
UJI DPPH
2, 2-diphenyl-1-picrilhydrazyl (DPPH •) adalah radikal nitrogen yang sangat stabil dan tersedia secara komersial, ditandai dengan warna ungu-merah yang intens, yang tumpul ketika dikurangi dengan adanya molekul dengan kapasitas antioksidan. Dengan pengukuran spektrofotometri pada 517 nm dari perubahan absorbansi larutan DPPH setelah reaksi dengan senyawa antioksidan, dimungkinkan untuk mengukur kapasitas pengurangan bahan uji apakah itu bertindak dengan transfer hidrogen atau transfer elektron. Hasilnya umumnya dinyatakan sebagai IC50, yaitu jumlah antioksidan yang mampu mengurangi konsentrasi DPPH awal sebesar 50%.
Ini adalah metode yang cepat, sederhana dan murah. Batas-batas teknik analitik ini diberikan oleh kemungkinan bahwa hasil analisis terdistorsi dalam kasus di mana molekul yang diteliti menyerap dalam kisaran panjang gelombang yang sama dari radikal DPPH atau di hadapan molekul besar berkerumun secara sterik yang tidak. mereka datang untuk bereaksi dengan bagian reaktif dari radikal. Ini menyebabkan DPPH bereaksi dengan antioksidan hingga 1000 kali lebih lambat daripada radikal peroksil.
UJI PCL (Photochemiluminescence)
Tes PCL didasarkan pada reaksi spesies radikal tertentu, anion superoksida (O2 • -), dihasilkan secara fotokimia oleh radiasi UV, dengan senyawa yang mampu memancarkan chemiluminescence. Penanda yang digunakan adalah luminol, molekul yang ketika dioksidasi oleh radikal bebas memancarkan cahaya yang dapat diukur menggunakan instrumen khusus (Photochem®). Kehadiran zat antioksidan dalam campuran ransum menonaktifkan spesies radikal yang menghambat emisi chemiluminescence. Analisis PCL sangat cepat dan sensitif. Selanjutnya, dengan penerapan dua protokol analitik yang berbeda, yang disebut ACW (Antioksidan Kapasitas Air larut) dan ACL (Antioksidan Kapasitas Lipid larut), kontribusi terhadap kapasitas antioksidan total komponen larut air (flavonoid, vitamin E) dapat diukur untuk senyawa yang sama. C, asam amino, dll.) Daripada yang liposoluble (tokoferol, tokotrienol, karotenoid, dll.). Kapasitas antioksidan dari produk yang diteliti diperoleh dengan membandingkan nilai-nilai yang dicatat dengan pengukuran yang berkaitan dengan molekul referensi standar, asam askorbat untuk protokol ACL dan Trolox untuk protokol ACW.
