Vaksin yang dilemahkan melibatkan penggunaan agen infeksi hidup yang virulensinya telah dilemahkan, sedemikian rupa sehingga tidak lagi bersifat patogen bagi manusia.
Vaksin-vaksin ini umumnya lebih kuat dalam menginduksi kekebalan protektif daripada vaksin yang tidak aktif. Bahkan, agen infeksi yang dilemahkan masih mampu meniru, bahkan jika dalam batas tertentu, untuk meniru infeksi nyata.
Agen infeksi yang dilemahkan diperoleh dengan mendukung pertumbuhannya dalam garis sel (virus) atau media kultur (bakteri), sehingga dapat mengurangi kapasitas pertumbuhannya dalam sel manusia. Masalah utama dengan jenis vaksin ini adalah bahwa atenuasi mungkin tidak stabil, sehingga mikroorganisme dapat kembali menjadi ganas.
Vaksin untuk campak, gondong, poliomielitis (vaksin Sabin) dan demam kuning terdiri dari virus hidup dan yang dilemahkan.
