Virus demam kuning tidak ditularkan oleh penularan langsung antar-manusia, tetapi hanya melalui gigitan nyamuk yang terinfeksi yang termasuk dalam genus Aedes (di lingkungan perkotaan), Haemagogus dan nyamuk sylvan lainnya (di hutan). Spesies yang paling terlibat dalam penularan demam kuning, baik di Afrika maupun di Amerika, adalah Aedes aegypti .
Orang yang terkena demam kuning - baik dalam bentuk nyata maupun tanpa gejala - telah terinfeksi sesaat sebelum timbulnya demam selama seluruh periode demam (rata-rata 5 hari). Memberi makan pada seseorang dengan viremia, nyamuk menjadi infeksius sekitar 2 minggu setelah makan darah dan tetap demikian selama hidup mereka.
Untuk mencegah penyebaran demam kuning lebih lanjut, perlu untuk menghindari gigitan nyamuk lebih lanjut pada orang sakit dengan mengisolasi mereka di lingkungan yang dilindungi oleh kelambu, dengan mempertimbangkan kebiasaan "siang hari" dari serangga ini.
