Diagnosis demam kuning tidak sederhana, karena gambaran klinis dapat menunjukkan gejala yang sulit dibedakan dengan demam berdarah virus lainnya, malaria, demam tifoid, leptospirosis, demam berdarah dan hepatitis.
Oleh karena itu, demam kuning harus dicurigai pada pasien di daerah endemis yang mengalami demam mendadak dengan bradikardia dan penyakit kuning. Tes laboratorium dilakukan segera di rumah sakit yang memenuhi syarat akan memungkinkan diagnosis untuk dikonfirmasi atau dikecualikan.
Investigasi yang berguna untuk tujuan ini termasuk jumlah darah, urinalisis, tes fungsi hati, kultur sel dan transkripsi retro dengan reaksi rantai polimerase (RT-PCR). Konfirmasi diagnostik disediakan oleh adanya antibodi spesifik yang terdeteksi oleh tes serologis, seperti ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay).
